酵母双杂交技术原理和步骤

酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid）是一种用来研究蛋白质相互作用的实验技术。该技术利用酵母细胞的自身特性，使得两个蛋白质分别与介导转录激活的Gal4转录因子不同区域结合，从而激发酵母细胞内特定的报告基因（reporter gene）的表达。当两个蛋白质的结合能够激活报告基因的表达，则表明这两个蛋白质之间存在相互作用关系。

具体实验步骤如下：

1.构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合，在表达载体中得到融合基因。

2.构建Gal4转录因子启动子激活报告基因的表达载体：将报告基因与Gal4转录因子启动子串联，在表达载体中得到表达Gal4转录因子的表达载体。

3.转化酵母细胞：将构建好的两个表达载体同时转化到酵母细胞中。

4.萃取细胞蛋白并交联：萃取酵母细胞蛋白，并将两种表达载体融合的蛋白交联。

5.筛选报告基因表达情况：观察酵母细胞是否表达出了报告基因，如表达了则表明两个融合蛋白之间存在相互作用。

该技术广泛应用于生物医学领域中，用于筛选蛋白质相互作用靶标，揭示细胞内信号传递和调控机制，并研究许多疾病的发生发展机制。